其他技术服务

1. 大小鼠外其他物种的基因靶向sgRNA设计请联系我们。

2. 如需其他抗性基因和荧光报告基因标记可按照要求提供，请咨询我们。

3. 可根据要求提供不同数量的质粒。可提供无内毒素的maxiprep质粒。

4. 我们提供如上所述体外sgRNA分析服务。

服务程序

1.确认sgRNA靶向基因

2.设计sgRNA并与客户确认

3.构建和检测质粒

4.运输质粒和质量报告

CRISPR活性测定

设计sgRNA后，非常关键的一步是快速准确地选择高活性sgRNA 百奥赛图开发了UCA检测方法^[1]，能够在体外高灵敏、便捷、快速测定sgRNA活性。UCA检测方法兼具高通量特点。 UCA检测方法基于单链退火（SSA）机制^[1]（图1）。

图1.使用SSA机制确定CRISPR / Cas9活性的示意图。

将CRISPR / Cas9真核表达质粒（表达Cas9和sgRNA）和pUCA质粒共转染到细胞中后，Cas9-sgRNA复合物将结合并切割对应于pUCA质粒上sgRNA的靶位点。触发SSA的DNA修复机制，当萤光素酶（er）的同源互补序列形成萤光素酶的完整编码序列时，该基因将被表达。萤光素酶活性表示sgRNA活性值；荧光素酶信号越高，表明sgRNA活性越高。

现在，许多sgRNA设计工具都具有预测sgRNA活性的功能。但预测结果和实际活性之间仍然存在很大差异。必须通过实验验证sgRNA活性，以确保后续实验的成功率。

 我们的数据表明，UCA检测方法能够很好地预测sgRNA的体内活性，该方法已在高影响力期刊中引用^[2,3]。通过百奥赛图UCA系统检验的高活性sgRNA有助于CRISPR / Cas9基因编辑的成功。

服务优势

1.高效，快速：从sgRNA设计到通过活性测定总计2周时间

2.灵敏，准确且接近体内活性

3.没有物种限制

[1]. Mashiko, D, et al. “Feasibility for large-scale mouse mutagenesis by injecting CRISPR/Cas plasmid into zygotes. ” Development Growth & Differentiation 56.1(2014):122.

[2]. Wu M, Wei C, Lian Z, et al. Rosa26-targeted sheep gene knock-in via CRISPR-Cas9 system[J]. Scientific reports, 2016, 6.

[3]. Lin, Zhimiao, et al. “Stabilizing mutations of KLHL24 ubiquitin ligase cause loss of keratin 14 and human skin fragility.” Nature Genetics 48.12 (2016): 1508-1516.

供体质粒构建

百奥赛图拥有10多年基因编辑课题经验，开发了数千个小鼠，大鼠和细胞系项目。可以构建用于基于ESC/EGE基因编辑的打靶载体和用于Tol2转基因的载体，提供快速的质粒设计和构建服务。

服务说明