位点特异性基因修饰通常使用内源DNA与外源DNA的同源重组(HR)。基因编辑技术源自小鼠胚胎干细胞(ESC)中的DNA同源重组技术(HR),随着基于DNA核酸酶基因编辑技术(包括锌指核酸酶(ZFN)和新兴的CRISPR/Cas9技术)的出现,已经发展到一个新的阶段。与ZFN和TALEN相比,CRISPR/Cas9技术效率更高,缩短了制备时间,降低了生产成本,打破了物种限制,还具有直接编辑患者组织中基因的潜力。
百奥赛图开发了一种基于CRISPR / Cas9的EGE™系统,该系统将大小鼠和细胞系的DNA大片段(> 5 kb)敲进效率提高近20倍。EGE™技术在课题中获得98%成功率,最大程度地缩短了制备基因编辑动物和细胞系模型的周期。
技术 | 优势 | 应用 | 服务周期 |
基于CRISPR / EGE™的基因编辑 | 高效率; 大片段基因敲除/敲进能力;同时靶向多个基因;适用于许多物种;易于构建。通过选择合适的sgRNA可以降低脱靶效应,并通过育种消除。Southern blot筛选出随机插入。 | 大片段敲除小鼠/大鼠 | 6-8个月 |
条件性敲除小鼠/大鼠 | |||
ROSA26位点基因敲入小鼠/大鼠 | |||
基因敲入 /点突变小鼠/大鼠 | |||
人源化小鼠/大鼠 | |||
报告基因敲进/先全敲后条敲小鼠/大鼠 | |||
常规细胞系敲除 / 敲入 | |||
hESC / iPS细胞敲除 / 敲入 | |||
基于ESC / HR的基因编辑 | 迄今为止建立的准确,精确和可靠的唯一可以满足几乎所有基因组修饰需求的基因编辑技术; 受到ES细胞限制(只有小鼠ES细胞可以使用此技术,不能应用于其他动物模型); 耗时;工作量大;成本高 | 大片段基因敲除小鼠 | 7-11个月 |
条件性敲除小鼠 | |||
ROSA26位点基因敲入(KI)小鼠 | |||
基因敲入/点突变小鼠 | |||
人源化小鼠 | |||
报告基因敲进/先全敲再条敲小鼠 | |||
Tol2转基因技术 | 传统的转基因技术因其快速、低成本、超大片段插入等优点而受到欢迎,但随着新的基因编辑技术的发展,尤其是EGE™,上述优势变得不太明显。尤其是随机插入,不稳定,后代扩繁鉴定需要耗费大量的人力物力 | 转基因小鼠/大鼠 | 2-3个月获得F0代 |
染色体工程 | Mb级的基因簇替换技术。独特的高科技技术,可用于特殊用途,例如抗体基因簇的人源化。 | 小鼠 | 非常高科技 |
其他服务 | 除了全面的基因编辑服务, Biocytogen还提供与基因编辑有关的里程碑式服务。 | CRISPR质粒构建; sgRNA活性检测; 供体质粒构建 |